免疫组织化学--石蜡切片（IHC-P）操作步骤！！

作者：必威滚球平台发布时间：2014-08-02

烘片：石蜡切片在60℃烘箱干燥30min，使组织贴片；
脱蜡：100%二甲苯，100%二甲苯，100%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，70%乙醇依次处理片子，二甲苯10min/次，乙醇5min/次；
复水：PBS处理20min；
抗原修复：柠檬酸修复液（PH6.0）修复，先将柠檬酸修复液加热到90℃左右，在92-98℃之间处理片子17min，后自然降温到室温后将片子取出，PBS洗涤，10min×3；
封闭：3% BSA-PBS 37℃处理1h，不用洗涤；
一抗孵育：用PBS稀释一抗，4℃过夜；
先用PBS涮洗片子几秒，后换PBST洗涤，10min×2，再换PBS洗涤，10min×2；
消除内源性氧化酶：3% H2O2室温处理13min，PBS洗涤5min×3；
二抗孵育：PBS稀释二抗，37℃孵育1h，PBS洗涤10min×3；
DAB显色：显色15-30min；
蒸馏水充分洗涤以终止显色反应；
核复染：苏木素进行核复染大概5-10min；
脱水，透明：70%乙醇，80%乙醇，95%乙醇，100%乙醇依次脱水，2min/次；100%二甲苯，100%二甲苯透明，5min/次；
封片：中性树胶封片；
镜检。

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